抗siPOOL回補序列（進一步的RNA干擾驗證）

抗siPOOL回補序列(siPOOL-resistant rescue constructs)
用于進一步的基因敲低驗證實驗

為了進一步驗證siPOOL產生的功能缺失表型是針對目標基因的，因此，我們將為您提供一個抗siPOOL的回補序列。當抗siPOOL回補序列在構建的質粒中表達時，靶基因的功能得到恢復，從而挽救或逆轉目標基因功能缺失的表型。

圖1. 抗siPOOL的回補序列設計。橙色表示目的基因上的siRNA識別位點。其中，突出顯示編碼序列（CDS）上的一個siRNA識別位點。舉例：GTC密碼子（編碼Val氨基酸）與替代密碼子如圖所示，粗體顯示了轉錄組中含量較高的替代密碼子。

設計步驟：

1. 在siRNA識別位點選擇替代密碼子，改變mRNA序列，但不改變蛋白質。

2. 對所有CDS中siRNA識別位點的所有密碼子進行替換，直到達到足夠的錯配。

3. 去除常見的限制性內切酶位點，添加側翼序列，將抗siPOOL的CDS克隆到載體中。

客戶數據：
案例1：siPOOL降低了激酶(X)的表達。抗siPOOL回補序列的表達恢復了激酶X的表達和功能，這表明了磷酸化底物X（p-底物X）的存在。

圖2. 在siPOOL介導的敲低和回補實驗前后，Western blot實驗檢測靶激酶X及其磷酸化底物（數據由未披露的客戶提供）。


案例2：復合物的形成（通過熒光互相關光譜測量，FCCS）在一個攜帶標記物的siPOOL介導的敲減后減少。而通過表達抗siPOOL回補序列，能夠恢復復合物的形成。

圖3. 在siPOOL介導的敲減和回補實驗中，通過FCCS測量兩個熒光標記蛋白之間的復合物形成（數據由Intana Bioscience GmbH友情提供）。

抗siPOOL回補序列可以作為序列數據文件提供，或也可以克隆到標準/自定義結構中提供。歡迎聯系我們詳詢抗siPOOL回補序列（進一步的RNA干擾驗證）。